1.1 仪器
Waters2695高效液相色谱仪;Empower色谱工作站(美国Waters公司);Waters XTerra C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);LC-20A型高效液相色谱仪(日本岛津公司);A560型紫外-可见光分光光度计(翱艺仪器有限公司);XR 205SM-DR型十万分之一天平(瑞士Precisa公司);BP-110S型万分之一天平(德国Sartorius公司);KQ3200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)。
1.2 试药
无水乙醇、甲醇、乙酸乙酯等均为分析纯,水为蒸馏水,乙腈、磷酸、醋酸等为色谱纯。原儿茶酸(批号:110809-200604)、儿茶素(批号:201102)、表儿茶素(批号:110878-200102)、芒柄花素(批号:111703-200501)、染料木素(批号:111704-200501)、大豆苷元(批号:20120426)、毛蕊异黄酮(批号:100618),均供含量测定用,中国药品生物制品检定研究院;异甘草素(纯度≥98%,批号:140716),四川省维克奇生物科技有限公司。
选取梅州、从化、惠州3个不同居群的野生鸡血藤,截取同一植株、同一条藤茎的不同粗度部位(分别具有1~9个树脂环的藤茎),趁鲜切片干燥,粉碎,过40目筛,置密封袋中保存备用,见表1。本实验所用材料经广州中医药大学刘军民教授鉴定为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn.的藤茎。
按照《中国药典:一部》(2015年版)附录XA法测定。
参照刘军民等[9]方法测定。
流动相A为0.1%磷酸,流动相B为乙腈,梯度洗脱(0~18 min,10%B;18~35 min,12%B;35~40 min,100%B;40~50 min,10%B);流速:1.0 m L·min-1;柱温:25℃;检测波长:290 nm(原儿茶酸)、280 nm(儿茶素、表儿茶素);进样量:20μL。对照品及供试品溶液色谱图见图1。
取原儿茶酸、儿茶素和表儿茶素对照品适量,精密称定,用50%甲醇配制成浓度分别为0.439、0.472、0.415 mg·m L-1的对照品贮备液。分别精密吸取100、200、200μL对照品贮备液至2 m L量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,制成混合对照品溶液,备用。
取鸡血藤粉末1.0 g,精密称定,加甲醇60 m L,静置30 min后超声50 min,滤过,水浴蒸干滤液,残渣用20 m L蒸馏水溶解,转置分液漏斗中;分别加乙酸乙酯20 m L,萃取3次,合并乙酸乙酯液,减压回收至干;用少许50%甲醇溶解,定容至10 m L量瓶,摇匀,过0.45μm微孔滤膜,即得。
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